ПЦР в реальном времени / qPCR

ПЦР в режиме реального времени

ПЦР (полимеразная цепная реакция) в режиме реального времени (или количественная ПЦР, англ. Real-Time PCR, qPCR) – метод, который используется для определения концентрации ДНК.
В данном методе реализованы общие принципы ПЦР. Основное отличие состоит в том, что при проведении Real-Time ПЦР одновременно происходят амплификация, детекция и количественное определение специфической последовательности ДНК в образце. Также отличительными чертами данного метода являются отсутствие стадии электрофореза, менее строгие требования к организации ПЦР-лаборатории и автоматические регистрация и интерпретация полученных результатов.
Измерение происходит в реальном времени после каждого цикла амплификации. Можно определять непосредственно количество копий ДНК, либо количество копий относительно внесенной ДНК или дополнительных калибровочных генов.
Для детекции продуктов амплификации в режиме реального времени применяются следующие наиболее распространенные подходы: 1) использование модифицированных олигонуклеотидов (зондов), которые флуоресцируют после гибридизации с комплементарными участками ДНК [TaqMan-зонды (данная методика основана на использовании 5'-экзонуклеазной активности полимеразы) и Molecular Beacons-зонды с комплементарными концевыми последовательностями], 2) использование флуорисцентных красителей, интеркалирующих в двуцепочечные молекулы ДНК (наиболее распространенным является SYBR Green) и 3) использование двух зондов с резонансным переносом энергии (LightCycler assay).
Real-Time PCR комбинируют с ПЦР, совмещенной с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР), для измерения количеств мРНК, что позволяет исследователю определять уровень экспрессии данного гена в отдельной клетке или ткани.
Для постановки ПЦР в реальном времени необходимы специальные амплификаторы, которые могут возбуждать и детектировать флуорисценцию. Applied Biosystems/Life Technologies совершенствует технологии уже более 10 лет. Любые современные задачи: анализ экспрессии генов и микроРНК, генотипирование однонуклеотидных замен (SNP), выявление транслокаций, определение вирусной нагрузки и т.п. – могут быть решены с применением оборудования Applied Biosystems. В настоящее время модельный ряд представлен следующими приборами: StepOne/StepOnePlus, 7500/7500Fast, ViiA7 и QuantStudio.
Системы StepOne/StepOnePlus детектируют 3/4 красителя, максимальное количество одновременно загружаемых образцов: 48/96 соответственно. StepOnePlus обладает инновационным VeriFlex-блоком, состоящем из шести независимо программируемых модулей. На данном приборе можно проводить анализ кривых плавления с высоким разрешением – пост-ПЦР метод для определения генетических вариаций ДНК (HRM-анализ).
Системы 7500/7500Fast детектируют 5 красителя, максимальное количество одновременно загружаемых образцов: 96. Модель 7500 имеет модификацию HID, предназначенную для идентификации личности и судебной медицины. Термоблок модели 7500 Fast предназначен для проведения ПЦР в скоростном режиме и проведения HRM-анализа.
Модели ViiA7 и QuantStudio – приборы нового поколения, обладающие еще более широким спектром возможностей и рядом уникальных характеристик. Основной особенностью является возможность выбора конфигурации термоблока. Данные системы способны детектировать 21 флуоресцентный краситель. Система QuantStudio позволят проводить цифровую ПЦР (Digital PCR) и работать с OpenArray-слайдами.
Универсальность и большой спектр реагентов и расходных материалов, разработанных Applied Biosystems/Life Technologies, позволяют проводить широкий спектр как научных, так и клинических исследований.

Отправить запрос
* Содержание запроса:
* Название организации:

Подразделение/
кафедра/
лаборатория:

* Город(адрес):
* ФИО:
* E-mail:
Телефон:
Комментарий:
* Код: Введите код 

Отсылая данный запрос в компанию Химэксперт, Вы даете согласие на обработку Ваших персональных данных и их включение в базу данных в соответствии с законодательством Российской Федерации.

 
Обратная связь
* ФИО:
E-mail:
* Телефон:
* Сообщение: