Обратная транскрипция

Наборы реагентов для контроля ПЦР
GeneAmp® RNA PCR Control Kit, 20 реакций
(каталожный номер 4308238)
Набор реагентов служит в качестве положительного контроля для мониторинга ПЦР на матрице РНК и может выступать в качестве внутреннего стандарта для определения количества мРНК.
Состав
контрольная РНК pAW 109 и контрольные праймеры DM151 и DM152.
Размер амплифицируемого продукта составляет 308 пар оснований.
GeneAmplimer® pAW 109 RNA, 50 мкл
(каталожный номер N8080037)
Контрольная РНК (концентрация 106 копий/мкл).
Может использоваться в качестве положительного контроля для мониторинга ПЦР на матрице РНК, а также в качестве внутреннего стандарта для определения количества мРНК некоторых цитокинов, лимфокинов, атероскрелотических факторов и др: TNF, IL-1, IL-1beta, IL-2, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-R, липопротеины низкой плотности, HMG, LPL и M-CSF.
(каталожный номер N8080119)
 
Праймеры и dNTP
Random Hexamers (100µl, 50µM), 100 реакций
(каталожный номер N8080127)
Короткие олигонуклеотиды со случайной последовательностью [d(N)6] отжигаются в случайных сайтах ДНК или РНК, выступают как праймеры для синтеза ДНК ДНК-полимеразой или обратной транскриптазой.
Oligo(dT)16 (100µl, 50µM), 100 реакций
(каталожный номер N8080128)
Гомоолигомерные дезоксирибонуклеотиды используются для праймирования и обратной транскрипции полиаденилированной РНК.
Праймеры для синтеза первой цепи кДНК при ОТ-ПЦР
Такие же праймеры используются в наборе реагентов RETROscript® First Strand cDNA Synthesis Kit.
I. Random Decamers (50 µM), 80 мкл (каталожный номер AM5722G);
II. Oligo (dT) Primer (50 µM), 80 мкл каталожный номер AM5730G
Синтез праймеров на заказ
Форматы
  • 4304970 – Small, 10 нмоль;
  • 4304971 – Medium, 80 нмоль;
  • 4304972 – Large, 130 нмоль.

Для заказа необходимо указать название и последовательность праймера. Максимальная длина праймера – 45 нуклеотидов.
10 mM dNTPs, 4 x 75 мкл
(каталожный номер AM8200)
Высококачественные дезоксинуклеотидтрифосфаты для синтеза кДНК. Такие же dNTPs используются в наборе реагентов RETROscript® First Strand cDNA Synthesis Kit.
Обратные транскриптазы и прочее
M-MLV Reverse Transcriptase (Cloned)
Обычно используется для проведения ОТ-ПЦР с применением одно-шагового протокола. Поставляется с 10-ти кратным оптимизированным буфером (10X First Strand Synthesis Buffer).
Форматы
  • AM2043 – 4000 единиц (концентрация 100 ед/мкл);
  • AM2044 – 10000 единиц (концентрация 100 ед/мкл).
MuLV (Moloney Murine Leukaemia Virus) Reverse Transcriptase, 100 реакций
(каталожный номер N8080018)
Рекомбинантная обратная транскриптаза (5000 единиц, 50 ед/мкл).
MultiScribe™ Reverse Transcriptase, 100 реакций
(каталожный номер 4311235)
Рекомбинантная обратная транскриптаза (5000 единиц, 50 ед/мкл).
Применение
подходит для проведения ОТ-ПЦР с применением одно- и двух-шаговых протоколов.
ArrayScript™
Модицифированная M-MLV обратная транскриптаза обеспечивает в два раза более высокий выход кДНК при малых количествах РНК (≈ 100 нг) по сравнению с другими обратными транскриптазами.
Поставляется с 10-ти кратным оптимизированным буфером (10x Reaction Buffer).
Форматы
  • AM2048 – 4000 единиц (концентрация 200 ед/мкл);
  • AM2049 – 10000 единиц (концентрация 200 ед/мкл).
HIV Reverse Transcriptase, 500 единиц
(каталожный номер AM2045)
Обратная транскриптаза HIV представляет собой гетеродимерный белок (субъединицы 51 и 66 кДа), является более термостабильной, чем обратные транскриптазы M-MLV и AMV и обладает высокой чувствительностью.
Поставляется с 10-ти кратным оптимизированным буфером (10x Reaction Buffer).
Основные характеристики
1) Концентрация 10 ед/мкл;
2) Температурный оптимум составляет 37-42°С;
3) Активность сохраняется при температуре 50° С, а также при проведении реакций длительностью более 1 часа.
Применение
работа с проблемными матрицами, например G/C-богатыми, а также оценка противовирусных агентов.
rTth DNA Polymerase
Рекомбинантная ультрачистая ДНК-полимераза rTth (94 кДа) подходит для амплификации РНК-матриц, так как обладает активностью обратной транскриптазы и ДНК-полимеразы в одной буферной системе.
Основные характеристики
1) Обратная транскрипция осуществляется при температуре 60-70° С.
2) Подходит для матриц с высоким содержанием G+C или со вторичными структурами.
I. rTth DNA Polymerase and EZ Buffer Pack, 500 единиц (каталожный номер N8080178)
Состав
ДНК-полимераза rTth DNA Polymerase, 5-ти кратный буфер EZ и 25mM Mn(OAc)2.
II. rTth DNA Polymerase with Buffer Pack, 500 единиц (каталожный номер N8080098)
Состав
ДНК-полимераза rTth, 10-ти кратный буфер для обратной транскрипции, буфер Chelating, 10mM MnCl2 и 25mM MgCl2.
rTth DNA Polymerase, XL
Основные характеристики
1) Ультрачистая термостабильная рекомбимнантная ДНК-полимераза обладает 5’-3’ и 3’-5’ экзонуклеазной активностью, обеспечивает точность и эффективность амплификации, а также более высокий выход длинных продуктов;
2) Наличие оптимизированного буфера (XL Buffer II).
Форматы
  • N8080187 – 400 единиц (концентрация 2 ед/мкл, объем реакции – 50 мкл);
  • N8080188 – 6x400 единиц (концентрация 2 ед/мкл, объем реакции – 50 мкл).
SuperTaq™ и SuperTaq™ Plus™
Основные характеристики
1) Повышенная термоустойчивость SuperTaq™ делает возможным ДНК-полимеризацию в 5’-3’ направлении при повторной денатурации. SuperTaq™ подходит для проведения ПЦР и ОТ-ПЦР;
2) SuperTaq™ Plus™ обладает коррекционной активностью, которая снижает уровень ошибок Taq-полимеразы, обеспечивает более высокий выход ПЦР-продукта особенно для фрагментов ≥ 1000 пар оснований. Эта полимераза длительного действия может амплифицировать до 20000 пар оснований.
Форматы
  • AM2052– SuperTaq™ 250 единиц (концентрация 5 ед/мкл);
  • AM2054 – SuperTaq™ Plus™ 50 единиц (концентрация 5 ед/мкл);
  • AM2056 – SuperTaq™ Plus™ 250 единиц (концентрация 5 ед/мкл).
RNase Inhibitor, 2000 единиц
(каталожный номер N8080119)
Ингибитор РНКаз – 50 кДа рекомбинантный фермент ингибирует действие РНКаз, предотвращает деградацию РНК, не обладает ДНКазной или эндонуклеазной активностями.
Концентрация – 20 ед/мкл. 

Обратная транскрипция

Обратная транскрипция – процесс синтеза двуцепочечной ДНК на матрице одноцепочечной РНК.
Идея обратной транскрипции сначала была не популярна, так как противоречила центральной догме молекулярной биологии (транскрипция ДНК в РНК, затем трансляция РНК в белок). Однако в 1970 году Темин и Балтимор независимо друг от друга открыли фермент, катализирующий данный процесс, и возможность обратной транскрипции была окончательно подтверждена. Фермент получил название РНК-зависимой ДНК-полимеразы или обратной транскриптазы, а по предложению академика В.А.Энгельгардта ему было дано короткое название – ревертаза.
Обратная транскрипция необходима для осуществления интеграции генома ретровирусов, представленного молекулами одноцепочечной РНК, в хромосому клетки – хозяина. При этом обратная транскриптаза вируса превращает одноцепочечную РНК вируса в двуцепочечную молекулу ДНК, способную к интеграции.
Обратная транскрипция лежит в основе целого ряда методик, широко используемых в современных лабораториях, таких как: ОТ-ПЦР (ПЦР, совмещенная с обратной транскрипцией), исследование уровня экспрессии генов с помощью количественной ПЦР или гибридизационных технологий, подготовка библиотек кДНК, клонирование генов, генно-инженерные исследования.
В лабораторной практике наиболее часто применяются обратная транскриптаза вируса лейкоза мышей Молони (Moloney Murine Leukemia Virus, M-MLV) и обратная транскриптаза вируса миелобластоза птиц (Avian Myeloblastosis Virus, AMV).
Кроме диких, не модифицированных ферментов, выпускаются ферменты, специально модифицированные методами белковой инженерии. В основном, усилия экспериментаторов, создающих новые модификации обратных транскриптаз, направлены на увеличение термостабильности и уменьшение РНКазной активности ферментов.
Повышение термостабильности позволяет увеличить температуру прохождения реакции обратной транскрипции, что способствует разрушению вторичных структур в матрице РНК, и, как следствие, увеличивает длину получаемого обратного транскрипта.
Обратные транскриптазы в дополнение к полимеразной активности обладают также рибонуклеазной активностью и способны разрушать РНК в РНК-ДНК дуплексах. Данная активность отрицательно сказывается на длине и выходе обратного транскрипта. Поэтому выключение РНКазной активности путем введения мутаций благоприятно сказывается на свойствах обратной транскриптазы.

Отправить запрос
* Содержание запроса:
* Название организации:

Подразделение/
кафедра/
лаборатория:

* Город(адрес):
* ФИО:
* E-mail:
Телефон:
Комментарий:
* Код: Введите код 

Отсылая данный запрос в компанию Химэксперт, Вы даете согласие на обработку Ваших персональных данных и их включение в базу данных в соответствии с законодательством Российской Федерации.

 
Обратная связь
* ФИО:
E-mail:
* Телефон:
* Сообщение: