AFLP

AFLP (Amplified fragment length polymorphism)

Метод AFLP является одной из разновидностей фингерпринтинга. AFLP использует рестриктазы для фрагментации геномной ДНК. К полученным фрагментам лигируются адаптеры. Затем проводится амплификация полученных фрагментов (праймеры садятся на адаптеры). Полученные в результате фрагменты разделяются методом капиллярного электрофореза на генетическом анализаторе, который и проводит их анализ.

Несмотря на свое название, метод AFLP, показывает лишь присутствие-отсутствие замен.

Применение. Технология AFLP способна детектировать разные типы замен в разных участках генома. Данная технология высоко чувствительна и хорошо воспроизводится. Главным достоинством этого метода является возможность применять его даже к генетически плохо изученным видам. По этим причинам AFLP широко используется для анализа филогенетически близких видов растений, грибов, животных и бактерий.

Реактивы для проведения AFLP:

Шаг 1: рестрикция ДНК и лигирование адаптеров.

Рестриктаза EcoRI (5´-G↓AATTC-3´ 3´-CTTAA↑G-5´)
(5,000 единиц -каталожный номер 15202013; 20,000 единиц - каталожный номер 15202039)


Лигаза для добавления адаптеров к рестрикционным фрагментам T4 DNA Ligase (1 U/µL) (100 единиц - каталожный номер 15224017; 500 единиц - каталожный номер 15224025; 4х500 единиц - каталожный номер 15224090)

Шаг 2: постановка первой ПЦР  (преамплификация) используются праймеры полностью комплементарные адапторам EcoRI и MseI.

5’ Fluorescent Labeled/Unlabeled Pairs – праймеры для определенных пользователем последовательностей для постановки реакции секвенирования.

Исследователю необходимо самостоятельно подобрать праймеры для постановки ПЦР.

Праймеры для постановки реакции

Реагенты для постановки ПЦР доступны по ссылке.

Шаг 3: постановка второй ПЦР.

В ней праймеры с EcoRI и MseI адапторами содержат на 3’-конце дополнительные и не комплементарные адапторам от 1 до 3 основания, для селективной амплификации.

Шаг 4: подготовка образцов к электрофорезу в генетическом анализаторе

Размерный стандарт GeneScan™ 120 LIZ™ dye Size Standard (800 реакций - каталожный номер 4324287)


Формамид Hi-Di™ Formamide (25 мл - каталожный номер 4311320; 4х5 мл - каталожный номер 4440753)

Шаг 5: проведение капиллярного электрофореза и анализ полученных результатов.

Отправить запрос
* Содержание запроса:
* Название организации:

Подразделение/
кафедра/
лаборатория:

* Город(адрес):
* ФИО:
* E-mail:
Телефон:
Комментарий:
* Код: Введите код 

Отсылая данный запрос в компанию Химэксперт, Вы даете согласие на обработку Ваших персональных данных и их включение в базу данных в соответствии с законодательством Российской Федерации.

 
Обратная связь
* ФИО:
E-mail:
* Телефон:
* Сообщение: