Реактивы для клонирования

Клонирование молекул ДНК (в том числе генов, фрагментов генов, совокупностей генов, ДНК-последовательностей, не содержащих гены) — это наработка большого количества идентичных ДНК-молекул с использованием живых организмов.

 Клонирование – довольно сложный процесс, который можно подразделить на несколько основных шагов. Каждый из этих шагов, в свою очередь можно реализовать различными способами с использованием многочисленных наборов. Ниже приведена схема выбора реактивов для клонирования:

Шаг 1. Получение генетического материала для клонирования. Возможно несколько вариантов его получения

1. Покупка уже готового материала. С помощью он-лайн ресурса Ultimate™ ORF Clone содержащего множество готовых клонов для человека и мыши, легко выбрать нужный Вам клон.

2. Получение клона с помощью кДНК библиотеки.

Преимущества:

- размер материала для клонирования может быть достаточно большим
- большое количество первоначального материала

Набор для получения кДНК библиотеки CloneMiner™ II cDNA Library Construction Kit

A11180 – 1 набор

3. Получение ДНК из тканей и клеток

Преимущества:

- возможность получения высокой концентрации НК, с использованием высокоцитируемого реагента TRIzol
- использование быстрого, 10 минутного протокола получения геномной ДНК даже из небольшого начального количества образца с помощью набора Dynabeads® DNA DIRECT™ Kit.

4. Обратная транскрипция

Преимущества:

- можно получить участок ДНК до 9 000 п.о.
- простота получения – реакция проводится в один шаг

Реактивы для проведения транскрипции можно выбрать ниже
Кат.№ наименование фасовка
12574030 SuperScript® III One-Step RT-PCR System with
Platinum® TaqHigh Fidelity DNA Polymerase
25 реакций
12574035 SuperScript® III One-Step RT-PCR System with
Platinum® TaqHigh Fidelity DNA Polymerase
100 реакций
18080044 SuperScript® III Reverse Transcriptase 10000 единиц
18080093 SuperScript® III Reverse Transcriptase 2000 единиц
18080400 SuperScript® III First-Strand Synthesis SuperMix 50 реакций

5. Амплификация ДНК. Для выбора реагентов для амплификации пройдите по ссылке.

Шаг 2. Очистка полученного генетического материала
Шаг 3. Выбор подходящей технологии клонирования
  Anza™ RestrictionEnzyme CloningSystem TOPO™/TA Cloning™ Kits Gateway™ CloningSystem System GeneArt™ Seamless Cloning and Type IIs Assembly Kits GeneArt™ Strings™DNA Fragmentsand Gene Synthesis
механизм действия Рестрикционная активность. Удобная система с 1 буфером для 128 рестриктаз. Векторы связываются с ДНК-топоизомеразой I, которая функционирует в качестве лигазы Использует сайт-специфичную рекомбинацию. Использует ряд перекрывающихся праймеров и гомологичную рекомбинацию. Клонирует до 4 фрагментов одновременно. GeneArt™ Strings™DNA Fragments - синтез генов готовых к клонированию, GeneArt™ Gene Synthesis - синтез генов готовых к трансфекции
нужен ли исходный ДНК материал да да да да нет
необходимость знать последовательность нуклеотидов в гене приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно да
нужно ли подбирать вектор да да да да Strings™: да Gene Synthesis: нет
доступные он-лайн ресурсы Vector Selection Tool Vector Selection Tool Vector Selection Tool Vector Selection Tool Vector Selection Tool
упрощенное традиционное клонирование Лучший выбор        
Быстрое и надежное получение ПЦР продукт или фрагментов ДНК   Лучший выбор      
Простота помещения интересующего фрагмента ДНК в широкий спектр векторных систем     Лучший выбор    
Простота сборки разных фрагментов ДНК       Лучший выбор  
Оптимизация и верификация последовательности         Лучший выбор
Рекомендованный дополнительный материал Ферменты-лигазы; компетентные клетки; набор для очистки ПЦР продукта; касеты E-Gel; ДНК маркеры и лэддеры Компетентные клетки, набор для очистки, GeneArt ДНК фрагменты. Ферменты Gateway® BP Clonase® Enzyme и Mix LR Clonase™, набор для клонирования с компетентными клетками, набор для очистки, PCR cloning kit с компетентными клетками или GeneArt StringsDNA Fragments, набор для очистки Он-лайн сервисы для выбора вектора и конструкци, библиотеки
Резюме Подходит для субклонирования в разнообразные сайты клонирования; необходима карта рестрикции Подходит для клонирования продуктов ПЦР и GeneArt синтезированных фрагментов. Подходит для экспрессии белков, в различных системах: от бактериальных до клеток человека. Подходит для клонирования различных фрагментов одновременно Позволяет получить готовый нужный ген для трансфекции (Gene Synthesis) и не отвлекаться на клонирование, а сосредоточиться на главной цели исследования.
Шаг 4. Действия после клонирования

Вы должны охарактеризовать фрагменты ДНК, клонированные в векторе, и подтвердить правильность вставки. Далее перечислены основные этапы работы после клонирования ДНК:

1. Трансформация клонов в E. coli.  Эта процедура позволит Вам провести дальнейшие операции с ДНК, такие как проверка QC или последующие эксперименты. Выбрать компетентные клетки для проведения данной процедуры Вам поможет «Competent cell selection guide» или информация, размещенная по ссылке. (так же см. Gene Art)

2. Получение ДНК из бактериальных клеток – выберите один из наборов для выделения ДНК.

3. Подтверждение правильности клонирования.  Его можно сделать с использованием капиллярного электрофореза или рестрикционного анализа с последующей детекцией продукта с помощью обычного электрофореза в геле.

Отправить запрос
* Содержание запроса:
* Название организации:

Подразделение/
кафедра/
лаборатория:

* Город(адрес):
* ФИО:
* E-mail:
Телефон:
Комментарий:
* Код: Введите код 

Отсылая данный запрос в компанию Химэксперт, Вы даете согласие на обработку Ваших персональных данных и их включение в базу данных в соответствии с законодательством Российской Федерации.

 
Обратная связь
* ФИО:
E-mail:
* Телефон:
* Сообщение: