Акустический цитофлуориметр Attune

Акустический цитофлуориметр Attune

Быстрое и точное детектирование редких событий

Проточный цитометр Attune® NxT с акустической фокусировкой — это настольный анализатор, использующий революционную технологию акустической фокусировкидля выравнивания потока клеток перед облучением лазером при многоцветной проточной цитометрии. Особенности системы:

  • Уникальная модульная конструкция: возможность быстро, не перемещая прибор, встраивать в него дополнительные лазеры (максимум 4) для увеличения числа детектируемых цветов (максимум 14)
  • Высокая скорость детекции: короткое время анализа без снижения качества позволяет выявлять редкие события и исключить этапы промывания клеток и лизиса эритроцитов.
  • Программное обеспечение для сбора и анализа данных, интуитивно понятное для всех пользователей независимо от уровня подготовки.
  • Компактность: вся конструкция поместится даже на небольшом лабораторном столе

Теперь, благодаря гибкости конструкции, включающей до 4 лазеров и до 14 цветов на выбор, новый цитометр Attune® NxT можно сконфигурировать под любой набор методик и практически под любой бюджет.

Многоцветный анализ на модульной конструкции

Проточный цитометр Attune® NxT с акустической фокусировкой является модульной системой с возможностью выбора до 4 лазеров и до 14 цветов (Рис. 1) для удовлетворения широкого спектра исследовательских и бюджетных запросов. Цитометр Attune® NxT совместим с большинством известных флуорофоров и флуоресцентных белков, что позволяет проводить на нем эксперименты с привычными вам реактивами (Таблица 1). При подключении лазера 561 нм прибор приобретает спсобность детектировать большое количество флуоресцентных белков (Рис. 2).

Рис. 1. Многопараметрический (10-цветный) анализ мышиных регуляторных Т-клеток и дендритных клеток на цитометре Attune® NxT. Лимфоциты были отобраны по параметрам FSC/SSC (А, слева), затем В-клетки, экспрессирующие 8220, исключены из дальнейшего анализа (А, в середине). Среди клеток В220—, CD45.2+ Т—клетки были выбраны по экспрессии CD3 (А, справа). Т—клетки CD3+ разделили на две популяции по экспрессии корецепторов CD4 и CD8 (В, слева). Среди Т-клеток CD4+ была выявлена субпопупяция супрессивных регуляторных Т-кпеток, которые экспрессируют фактор транскрипции FoxpЗ и поверхностный клеточный маркер CD25 (IL-2Ra) (В, справа). Клетки CDЗ— были отобраны для выявления редкой популяции CD11с+ МНСII+, специализированных антигенпрезентирующих дендритных клеток (С, слева). Дендритные клетки селезенки далее можно разделить на субпопупяции дендритных клеток CD11b+ и CD8+ (С, справа), каждая из которых обладаетуникапьными антигенпрезентирующими свойствам.


Хотите ли вы собрать прибор своей мечты сразу или постепенно достраивая до оптимальной 105 конфигурации, цитометр Attune® NxT всегда готов развиваться вместе с вами в соответствии с вашими лабораторными потребностями.

  

Рис.2.Детекция флуоресцентных белков и живых клеток. Клетки U2OS одновременно подвергли трансдукции реактивами Cellight® Nucleus-GFP(артикул C10602) и Cellight® Plasma Membrane-RFP(артикул C10608). на цитометре Attune®, используя лазер 488 нм с фильтром эмиссии 530/30 и лазер 561 нм с фильтром эмиссии 585/16.

Высокая надежность и максимальная эффективность сигнала

Новая конструкция оптической системы обеспечивает жесткую фиксацию лазеров, направленных точно на ось потока образца, что гарантирует долговременную надежность и воспроизводимость результатов. В цитометр можно встроить до 4 твердотельных лазеров (405, 488, 561 и 637 нм). Лучи лазеров имеют профиль с плоской вершиной (однородность интенсивности излучения в поперечном сечении), что минимизирует погрешности в случае нестабильности проточной (расфокусировка клеток) и оптической (смещение лазера) систем. Свет, излучаемыи клетками В проточной ячейке, передается на детекторы посредством оптоволоконных кабелей с высокой эффективностью и минимальными потерями.

Непосредственно перед фотоумножителями установлены светофильтры. При необходимости (слишком слабый сигнал, избыточное взаимное влияние флуорофоров) можно заказать светофильтры с нужными параметрами, которые затем легко устанавливаются самостоятельно, без помощи сервисного инженера.

Таблица 1. Руководство по выбору флуорофоров для цитометра Attune® NxT

Лазер Возбуждение Фильтр Эмиссии Обычный краситель Флуоресцентный белок
Фиолетовый 405 нм 440/50 Pacific BlueTM ECFP
512/25 Pacific GreenTM  
603/48 Pacific OrangeTM  
710/50 Qdot® 705  
Синий 488 нм 488/10 FSC  
488/10 SSC***  
530/30 FITC EGFP, Emerald GFP
574/26* Propidium iodide EYFP
590/40*** Propidium iodide
Fluorescent proteins
EYFP
695/40 PerCP/Cy® 5.5  
780/60 PE-Cy®7, Qdot® 800  
Желтый 561 нм 585/16 PE RFP
620/15 PE-Texas Red® mCherry, dTomato, DsRed, mStrawberry
695/40 PE-Cy®5.5  
780/60 PE-Cy®7  
Красный 637 нм 670/14 APC  
720/30 Alexa Fluor®700  
780/60 APC-Alexa Fluor®750  

*Применяется для детекции РЕ в случае отсутствия желтого лазера с фильтром эмиссии 590/40.

**Боковое рассеяние можно детектировать с помощью любого лазера (при исходных настройках это синий). Фиолетовое боковое рассеяние рекомендуется для методик без промывания и лизиса эритроцитов.

  

Рис. 3. Образец конфигурации фильтров для цитометра Attune® NxT Acoustic Focusing Cytometer. Фильтры легко заменяются для создания пользовательской конфигурации, отвечающей требованиям эксперимента.

Что такое акустическая фокусировка?

Вместо гидродинамических сил цитометр Attune® NxT использует ультразвуковые волны (свыше 2 МГц, аналогичные тем, что применяются в УЗИ), для выстраивания клеток в единую сфокусированную линию вдоль центральной оси капилляра (Рис. 4). Эффективность акустической фокусировки практически не зависит от скорости потока образца, что позволяет клеткам фокусироваться строго в точке пересечения слазером при любом соотношении объемов образца и проточной жидкости (Рис. 5). Это, в свою очередь, позволяет улавливать больше фотонов для высокоточного анализа при существенно большей скорости пропускания образца. Для работы цитометра Attune® NxT не требуются большие объемы высокоскоростной проточной жидкости, котораяможет повреждать клетки. Кроме того, волюметрические шприцевые насосы обеспечивают абсолютный подсчет клеток без калибровочных частиц, что минимизирует стоимость и длительность пробоподговки. Напротив, цитометры, которые используют гидродинамическую фокусировку, поддерживают постоянную линейную скорость образца на всех объемных скоростях потока образца, что приводит к расфокусировке клеток вследствие уширения потока.

  

Рис. 4. Акустическая фокусировка в действии. В капиллярную систему цитометра с акустической фокусировкой вносили флуоресцентные микросферы. Без акустической фокусировки частицы двигаются беспорядочно (слева). С применением фокусировки частицы выстраиваются в единую линию (справа).

Рис. 5. Акустическая фокусировка в сравнении с обычной гидродинамической фокусировкой при прохождении частиц сквозь луч лазера. (А) При акустической фокусировке клетки остаются в строго выравненном состоянии даже при более высоких скоростях потока образца, что приводит к снижению вариации сигнала и повышению качества данных. (В).При традиционной гидродинамической фокусировке повышение скорости потока образца ведет к расширению зоны фокуса, что повышает вариацию сигнала и снижает качество данных.

Разбавляйте образцы, чтобы не терять качество данных

Отмывание клеток и лизис эритроцитов могут привести ксерьезным повреждениям и потере клеток. Способность цитометра Attune® NxT феноменально быстро собирать данные с образцов большого объема позволяет исключить шаги отмывания клеток и лизиса эритроцитов, что минимизирует потери клеток и существенно упрощает пробоподготовку. (Рис. 6). Это свойство Attune® NxT также чрезвычайно полезно при анализе образцов с очень низкой концентрацией. Анализ разбавленных образцов, таких как спинномозговая жидкость (CSF), стволовые клетки и любые другие образцы с низкой концентрацией клеток, требует много времени. Цитометр Attune® NxT быстро анализирует даже очень разбавленные образцы без потери качества данных. Труднополучаемые образцы, такие как кровь или костный мозг мыши, аспираты тонкоигольной биопсии, а также любые другие образцы с малым количеством клеток, можно окрашивать, а затем разводить без отмывания и лизиса эритроцитов. Высокая скорость сбора данных позволяет анализировать до 4 мл образца всего за 4 минуты. Исключение этапа пробоподготовки дает возможность проводить исчерпывающий анализ без риска потери наиболее ценных образцов.

  

Рис. 6. Исключение этапа пробоподготовки без снижения качества данных. 5 мкл цельной крови окрашивали антителами, инкубировали и разводили в 11 мл буферного раствора, после чего анализировали на цитометре Attune® NxT. Излучение с длиной волны 405 нм хорошо поглощается эритроцитами, что позволяет проводить гейтирование по дифференциальному SSC: точечная диаграмма в середине рисунка иллюстрирует отделение лейкоцитов от эритроцитов по SSC излучения 405 и 488 нм. Выбранная популяция лейкоцитов затем анализируется по FSC/SSC для выявления лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов без использования флуоресцентных меток.

Быстрое детектирование редких событий

Для детектирования редких популяций клеток с высокой степенью надежности требуется анализ очень большого количества событий, что значительно увеличивает время сбора данных. Скорость анализа на цитометре Attune® NxT в 10 раз выше, чем на других проточных цитометрах, — до 1000 мкл/мин и до 2 ⋅ 107 событий в рамках одного теста. Это обеспечивает высокую скорость детекции редких событий с достаточной точностью без потерь данных.

Точность и чувствительность для любой скорости потока образца

Цитометр Attune® NxT обеспечивает максимальную чувствительность анализа в самых требовательных экспериментах. Точность выравнивания клеток в потоке поддерживается даже при самых высоких скоростях пропускания образца — до 1000 мкл/мин. Это обеспечивается акустической фокусировкой клеток, которая позволяет получать меньшие значения коэффициента вариации (CV) для успешного отделения слабых сигналов от шума (что повышает воспроизводимость результатов) и разделения сигналов, близких по силе, между собой (Рис. 8).

Минимальная вариабельность данных

Анализ жизненного цикла клеток — лишь один пример эксперимента, в ходе которого крайне важно измерять интенсивность флуоресценции с высочайшей точностью для разделения нескольких популяций клеток. При использовании цитометра Attune® NxT вариабельность результатов минимальна вне зависимости от скорости пропускания образца. Вам больше не придется жертвовать пропускной способностью в пользу чувствительности анализа.

  

Рис. 7. Сбор данных с более чем 1 миллиона живых клеток и детекция минорной популяции (0,2%) дендритных клеток. Плазмоцитоидные дендритные клетки (pDC) — это специфическая популяция клеток, которые вырабатывают большое количество интерферонов|типа в ответ на вирусную. Эти клетки выявляются по иммунофенотипу CD19—/В220high/СDЗ17+. Для четырехцветного окршивания спленоцитов мыши использовались конъюгаты антител CD19-Pacific BlueТМ, CDЗ17-Alexa FluorТМ 488, CD45R/В220-РЕ и краситель мертвых клеток SYTOX® AADvancedТМ. Гейтирование по сигналу красителя SYTOX® AADvancedТМ выявило живые клетки, среди которых затем были отобраны клетки CD19—. Двухпараметрический анализ клеток CD19— по CD45R/В220 и CD317 был проведен для выявления клеток pDC. Всего было собрано 1,3 млн клеток при скорости потока 500 мкл/мин и концентрации 7,5 ⋅ 107 клеток/мл. Плазмацитоидныедендритные клетки были определены какдвойные положительные В220+/CDЗ17+ (верхний правый квадрант и составили 0,851% живых клеток CD19—, что соответствует 0,194% всех спленоцитов.

Программное обеспечение, соответствующее вашим требованиям

Программное обеспечение Attune® NxT разработано для интенсивного сбора данных и быстрого анализа результатов с помощью интуитивного интерфейса, в котором легко разберется любой пользователь (Рис. 10). Вам не придется просматривать множество окон, все необходимые функции будут под рукой. Параметры экспериментов легко задавать, настраивать и сохранять для будущих исследований. Тесты для автоматического расчета компенсации легко проектируются по встроенному протоколу.

Программа способна визуализировать в реальном времени в виде диаграмм очень большие массивы данных (до 20 миллионов событий в образце), обновляя изображение на экране без задержек и зависаний при любых изменениях параметров. Дизайн экспериментов и анализ результатов значительно упрощаются с помощью диспетчера конфигурации фильтров эмиссии (filter configuration manager). Этот инструмент позволяет выбрать из выпадающего списка подходящий флуорофор для любого канала флуоресцентной детекции. Списки флуорофоров могут быть дополнены пользователем. При анализе данных название выбранных флуорофоров отображаются в подписи к осям диаграмм.

  

Рис. 8. Измерение чувствительности при разных скоростях потока. Флуоресцентные микросферы (Spherotech Rainbow Calibration Particles, 3,2 мкм) анализировали на лидирующем традиционном проточном цитометре (А) и на цитометре с акустической фокусировкой Attune®® NxT (В, С), используя лазер 561 нм и фильтры эмиссии 610/20 (А) и 610/15 (В, С). Традиционный цитометр настроили на предельную чувствительность (что соответсвует скорости потока ~12,5 мкл/мин). Цитометр Attune® NxT настроили на 12,5 мкл/мин (кактрадиционный цитометр, В, и на 500 мкл/мин (40-кратный объем образца, С). Цитометр Attune®О NxT показал сравнимые или лучшие результаты даже при самых высоких скоростях пропускания образца.

Скорость потока образца (мкл/мин) 12.5 25 100 200 500 1.000
G1CV% 2.99 3.03 2.76 2.94 2.70 2.96
G2/G1 1.99 1.99 1.99 2.05 2.05 2.03

Рис. 9. Минимальная вариация данных при высоких скоростях пропускания образца через цитометр Attune® NxT. Клетки Jurcat фиксировали и окрашивали припидий иодидом, обрабатывали рибонуклеазой и анализировали при концентрации 106 клеток/мл на цитометре Attune® NxT при разных скоростях пропускания. Левый пик на всех графиках отражает число клеток в фазах G0/G1, правый пик отражает число клеток в фазах G2/М. Вне зависимости от скорости пропускания образца ширина пиков G0/G1 и G2/М и коэффициент вариации (CV%) при использовании цитометра Attune® NxT остается постоянной, даже при самой высокой скорости 1000 мкл/мин.

Фиг. 10. Интерфейс программного обеспечения Attune® NxT

Сервис и поддержка

Цитометр Attune® NxT имеет техническую поддержку и участвует в сервисных программах по всему миру. Мы сосредоточены на индивидуальной поддержке с момента визита нашего специалиста по продукции и на протяжении всего срока эксплуатации прибора. В комплектацию цитометра Attune® NxT включен расширенный годовой сервисный контракт, который включает:

  • Исчерпывающее обучение (2 пользователя на прибор)
  • Методическая поддержка
  • Техническая поддержка по всему миру
  • Плановое обслуживание

Информация для заказа

Цитометр Attune® NxT с акустической фокусировкой
Количество лазеров Цвета лазеров Количество анализируемых параметров Артикул
4 Синий, красный, желтый, фиолетовый 16 А24858
3 Синий, фиолетовый, желтый 13 А24859
3 Синий, красный, фиолетовый 13 А24860
2 Синий, желтый 9 А24861
2 Синий, фиолетовый 10 А24862
2 Синий, красный 9 А24863
1 Синий 6 А24864

Технические характеристики

Отправить запрос
* Содержание запроса:
* Название организации:

Подразделение/
кафедра/
лаборатория:

* Город(адрес):
* ФИО:
* E-mail:
Телефон:
Комментарий:
* Код: Введите код 

Отсылая данный запрос в компанию Химэксперт, Вы даете согласие на обработку Ваших персональных данных и их включение в базу данных в соответствии с законодательством Российской Федерации.

 
Обратная связь
* ФИО:
E-mail:
* Телефон:
* Сообщение: